沉降菌測試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、菌落：細(xì)菌培養(yǎng)后，由一個或幾個細(xì)菌繁殖而形成的一細(xì)菌集落，簡稱CFU。通常用個數(shù)表示。

2、測試方法：沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)48小時以上培養(yǎng)，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落數(shù)，來評定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定無塵室的潔凈度。

3、所用的儀器和設(shè)備

1）高壓消毒鍋：使用時參照文件GZ-ZL-SOP-066-00進(jìn)行操作。

2）恒溫培養(yǎng)箱：必須定期對培養(yǎng)箱的溫度計進(jìn)行檢定。

3）培養(yǎng)皿：一般采用中90mm×15mm硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。使用前將培養(yǎng)皿置于121℃濕熱滅菌20分鐘。

4、培養(yǎng)基：普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基加熱熔化，冷卻至約45℃在無菌操作條件下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15m1。待瓊脂培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)基平皿放入30～35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)數(shù)小時，若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用，制備好的培養(yǎng)基平皿應(yīng)在2～8℃的環(huán)境中存放。

5、測試步驟

1）采樣方法：將已制備好的培養(yǎng)皿放置在預(yù)先確定的取樣點(diǎn)，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5小時，再將培養(yǎng)皿蓋上蓋后倒置。
2）培養(yǎng)，時間不少于48小時。每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗(yàn)，檢查培養(yǎng)基本身是否污染，可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。

3）菌落計數(shù)：用肉眼直接計數(shù)，然后用5～10倍放大鏡檢查，有否遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上的菌落計數(shù)。

6、注意事項

1）測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。

2）采取一切措施防止人為對樣本的污染。

3）對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。

4）由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。

5）采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。

7、測試規(guī)則

1）測試狀態(tài)

（1）沉降菌測試前：被測試無塵室（區(qū)）的溫濕度須達(dá)到規(guī)定的要求，靜壓差、必須控制在規(guī)定值內(nèi)。被測試無塵室（區(qū)）已消毒。

（2）測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，并在報告中注明測試狀態(tài)。

（3）測試人員：測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于2個人。

2）測試時間

（1）對單向流，如100級凈化房間內(nèi)及層流工作臺，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10分鐘后開始。

（2）對非單向流，如10000級、100000級以上的凈化房間，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30分鐘開始。

8沉降菌計數(shù)
1）最少采樣點(diǎn)數(shù)目：可按表1確定。在滿足最少測點(diǎn)數(shù)的同時，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見表2。??表1最少采樣點(diǎn)數(shù)目

注：表中的面積對于單向流無塵室是指送風(fēng)面積，對于非單向流無塵室是指房間面積。?????????表2最少培養(yǎng)皿數(shù)

2）采樣點(diǎn)的布置：工作區(qū)測試點(diǎn)位置離地0.8～1.5m左右（略高于工作面）。可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加測點(diǎn)，采樣點(diǎn)的布置應(yīng)力求均勻，避免采樣點(diǎn)在某 局部區(qū)域過于集中，某局部區(qū)域過于稀疏。

3）記錄：測試報告中應(yīng)記錄房間溫度、相對濕度、壓差、測試狀態(tài)及測試數(shù)據(jù)。

4）結(jié)果計算：用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。平均菌落數(shù)的計算見下式：m1+m2+……+mn

平均菌落數(shù)m=n

式中：m為平均菌落數(shù)；m1為1號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；m2為2號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；mn為n號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；n為培養(yǎng)皿總數(shù)。

5）結(jié)果評定：用平均菌落數(shù)判斷無塵室的空氣中的微生物。

6）無塵室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評定標(biāo)準(zhǔn)（見表3）。????????????????????表3

7）若某無塵室（區(qū)）的平均菌落數(shù)超過評定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對此區(qū)域先行消毒，然后重新測試兩次，測試結(jié)果必須合格。

主要參考文獻(xiàn)：國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 16294-1996